固定是組織處理最重要的一步，也是在整個(gè)制片過程中最無法補(bǔ)救的一步。所謂“固定”，就是組織離體后，用各種辦法使其細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)盡可能接近其生活狀態(tài)時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過程。固定的目的是為了防止組織、細(xì)胞自溶與腐敗，防止細(xì)胞內(nèi)酶對(duì)蛋白質(zhì)的分解作用，使細(xì)胞內(nèi)的各種成分如蛋白質(zhì)抗原、脂肪、碳水化合物或酶類轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持原有的結(jié)構(gòu)與生活時(shí)相仿，還要最大程度地保存抗原、DNA等物質(zhì)。另外，組織固定后，具有硬化作用，增加了組織的韌性，有利于取材和組織脫水。如果標(biāo)本沒有及時(shí)固定或固定不恰當(dāng)，組織已經(jīng)自溶或腐敗，將無法逆轉(zhuǎn)。

固定的注意事項(xiàng)：

（1）固定必須及時(shí)：組織離體后，必須在1小時(shí)內(nèi)放入4%中性緩沖甲醛液內(nèi)固定，有特殊要求的組織如胃癌檢測(cè)Her2應(yīng)在30分鐘內(nèi)放入4%中性緩沖甲醛液內(nèi)固定。

（2）固定液的選擇：4%中性緩沖甲醛液。

（3）固定液的pH：7.0。

（4）固定液的量：必須大于組織體積的4-10倍。

（5）固定液的濃度：濃度必須準(zhǔn)確，過稀或過濃都會(huì)影響組織的形態(tài)和固定的效果。

（6）固定液的質(zhì)量：發(fā)現(xiàn)固定液變質(zhì)，如甲醛液體產(chǎn)生白色沉淀，應(yīng)立即更換。

（7）固定的時(shí)間：新鮮標(biāo)本，應(yīng)該剖開固定12-24小時(shí)后再取材。大標(biāo)本取材后在室溫下還需再固定4-6小時(shí)，小標(biāo)本取材后應(yīng)該在室溫下再固定3-4小時(shí)，如果是新鮮小標(biāo)本取材，必須再固定4-8小時(shí)。如果室內(nèi)溫度低，固定時(shí)間還需延長(zhǎng)。

（8）固定的溫度：最好固定于室溫，如時(shí)間不夠，可放于35-45℃的全封閉組織處理機(jī)內(nèi)，溫度過高，會(huì)加快組織的自溶和組織的過度收縮，加溫可破壞細(xì)胞內(nèi)的抗原。

（9）固定液的滲透速度：4%中性緩沖甲醛液3-5mm/24小時(shí)。

（10）需要做免疫組化或分子病理的標(biāo)本，從標(biāo)本離體至組織脫水開始，總固定時(shí)間一般不要超過48小時(shí)，同時(shí)也不要少于24小時(shí)（厚度2-3mm）。

 在中國(guó)，組織固定是病理切片質(zhì)量存在問題的最主要原因：

1、固定不及時(shí)，手術(shù)醫(yī)生將標(biāo)本離體后不及時(shí)固定。

2、沒有剖開固定。

3、固定液量不足（包括固定容器太?。?。

4、沒有用規(guī)范的固定液。

5、固定時(shí)間不夠，有的病理科為了使病理報(bào)告盡快出來而縮短了固定時(shí)間。  

沒有充分的固定，就不可能取好材，不可能有優(yōu)質(zhì)的HE切片，也不可能有好的免疫組化和分子病理結(jié)果，因此，唯一能解決這個(gè)問題只有靠病理科自己，建議各醫(yī)院病理科應(yīng)該有專業(yè)標(biāo)本處置人員：將手術(shù)室的標(biāo)本新鮮切下后在半小時(shí)內(nèi)直接送至病理科，由病理科專業(yè)人員剖開、加入足量的固定液。只有這樣，才能真正將組織固定工作做好。